Legionelles : Nouvelle Methode de Detection par PCR Qui Donne des Resultats en Quelques Heures Contre 14 Jours Par La Methode Classique

L’occurrence de nombreuses épidémies au cours de l’année 2003, notamment dans le Pas-de-Calais, a montré la nécessité d’avoir une méthode complémentaire de la méthode microbiologique (NFT 90-431 de septembre 2003), pouvant donner des résultats beaucoup plus rapidement, de façon à rendre plus efficaces les actions correctives.

Sur la base de ses six années d’expérience en biologie moléculaire dans le domaine des OGM et ses trente cinq ans d’existence dans le domaine de l’environnement, SGS Multilab a développé et validé une technique rapide de détection et de quantification des Légionelles par PCR (Polymerase Chain Reaction) en temps réel.

La PCR détecte la présence de quelques copies du génome de la bactérie, même si les bactéries sont non cultivables ou cachées dans des protozoaires ou des amibes, alors que la méthode normalisée ne dose que les légionelles revivifiables. C’est une méthode rapide (moins de 2 jours contre environ 14 jours), sensible (5UG/L contre 250 ou 500 UFC/L), plus fiable, plus reproductible, non sujette aux interférences dues à la flore parasite (souvent présente dans les TAR – Tours Aéro-Réfrigérantes) et qui fournit en même temps les teneurs en legionella sp. et legionella pneumophila.

Cette méthode par PCR est complémentaire de la méthode normalisée NFT 90-431 qui est, de nos jours, la seule méthode reconnue sur laquelle s’appuie la réglementation française. Elle devrait être normalisée en 2005 et est utilisée principalement dans deux cas :

• Monitoring précis d’une TAR ou d’un circuit d’eau chaude sanitaire
• Contrôle rapide après détection d’une pollution dans un circuit et avant remise en fonction

Principe de la méthode
Le principe de cette méthode repose sur la détection d’ADN après amplification : La PCR permet de copier un très grand nombre de fois une séquence d’ADN présente en très faible quantité dans le génome des bactéries d’un échantillon d’eau. La détection fait appel à des amorces (petites séquences d’ADN) spécifiques du genre legionella et de l’espèce legionella pneumophila. La quantification fait appel à une sonde ADN marquée par des fluorochromes, qui s’hybride elle aussi, de manière spécifique aux séquences d’ADN cible. Les fluorochromes présents sur la sonde émettent une fluorescence dont l’intensité est proportionnelle au nombre de copies de la séquence d’ADN cible obtenue par amplification. Il est ainsi possible de définir en temps réel la quantité exacte d’unité génomes présente dans l’échantillon de départ, une Unité Génome par litre (UG/L) étant considéré comme équivalente à une bactérie par litre. Il n’y a pas à ce jour de corrélation directe entre les UG/L et les UFC/L (Unité Formant Colonie) de la méthode officielle.

Partenaire fiable et reconnu, SGS Multilab est accrédité COFRAC sur le programme 100-2 dans le domaine des analyses d’eau, notamment sur l’analyse des legionella spp. et legionella pneumophila. Il est également agréé par le Ministère de l’Environnement pour les analyses d’eaux et de sédiments ainsi que par le Ministère de la Santé pour le contrôle sanitaire des eaux de consommation humaine et de baignade.

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